Berliner und Münchener Tierärztliche Wochenschrift 126, 350-356

DOI: 10.2376/0005-9366-126-350

© Schlütersche Verlagsgesellschaft mbH & Co. KG. 2013

Publiziert: 09/2013

Zusammenfassung

Die Messung der Plasma ACTH-Konzentration gilt neben dem Dexamethason- Suppressionstest inzwischen als Methode der Wahl zur Diagnostik und Beurteilung des Therapieverlaufes des Equinen Cushing Syndroms (ECS). Entnahmeprotokolle und Analysengefäße unterscheiden sich dabei zwischen verschiedenen Laboren. Um die Reproduzierbarkeit von Plasma ACTH-Konzentrationen zwischen vier verschiedenen Laboren (A, B, C, D) in Deutschland und innerhalb der Labore zu beurteilen, wurden zehn Pferde mit bereits zuvor diagnostiziertem Equinem Cushing Syndrom sowie vier gesunde Pferde untersucht.
Von jedem Pferd wurden zu jedem Labor zwei zeitgleich entnommene Blutproben mit unterschiedlicher Beschriftung geschickt (verblindet). Die Probenentnahme wurde dabei immer morgens zur gleichen Uhrzeit durchgeführt. Das verwendete Probengefäß (mit oder ohne Zusatz von Gerinnungs- und Proteinasehemmer) und der Versand der Proben erfolgten genau nach Vorgabe des einzelnen Labors.
Bei einem Labor (Labor A) wurden zusätzlich der Einfluss des Zentrifugationszeit- punktes der Blutproben (sofort oder nach einer Stunde; n = 6) sowie der Zusatz von Aprotinin zum Probengefäß (n = 14) auf die ACTH-Plasmakonzentration untersucht. In den Laboren wurden die Proben entsprechend den gültigen Laborprotokollen weiterverarbeitet und analysiert. Die Bestimmung der ACTH-Konzentration erfolgte dabei mittels Chemolumineszenz-Immunoassay.
Insgesamt wurden 132 Blutproben analysiert. Bei den Ergebnissen der Doppel-Blut- proben des gleichen Pferdes innerhalb der Labore zeigt sich eine Standardabweichung zwischen ± 6 und ± 27 pg/ml (Ø 19,29 pg/ml). Die Standardabweichung der Wiederholungspräzision des Variationskoeffizienten betrug 13,48 %. Bei einem Labor wurden in den Blutproben des gleichen Pferdes in der ersten Probe eine ACTH-Kon- zentration von 121 und in der zweiten Probe eine Konzentration von
Sofortiges Zentrifugieren der Blutproben ergab deutlich hohere ACTH-Konzentrationen von durchschnittlich 11,6 pg/ml. Die zusätzliche Verwendung des Proteinasehemmers Aprotinin zeigte in unserer Untersuchung keinen Einfluss auf die gemessene ACTH-Konzentration.

Summary

The evaluation of plasma ACTH and the dexamethasone suppression test are considered the methods of choice to evaluate the course of therapy of pituitary pars intermedia dysfunction (PPID). Sampling protocols as well as vacutainers for analysis differ between the laboratories. To evaluate the reproducability of plasma ACTH measurement between four different laboratories (A, B, C, D) in Germany as well as within the laboratories themselves, ten horses with previously diagnosed PPID and four healthy horses were sampled and analyzed. Each laboratory received two differently labeled samples of each horse which had been drawn at the same time (blinded samples). Sampling was performed in the morning at the same time. The sampling vacutainers (with and without addition of coagulation and proteinase inhibitors) and postage of the samples was performed according to laboratory standards. In one laboratory the influence of the time of centrifugation (immediately after taking blood versus after one hour) was determined. The samples were processed and analyzed according to laboratory protocols. Determination of ACTH levels was performed using chemiluminescence immunoassay. In total 132 blood samples were analyzed. The results of doubled blood samples of the same horse showed a standard deviation ranging from ± 6 to ± 27 pg/ml within the laboratories (Ø 19,29 pg/ml). The standard deviation of the repeatability of the variation coefficient was 13,48%. Blood samples of the same horse resulted in ACTH levels of 121 pg/ml in the first probe and in ± 26,4 pg/ml (Ø 27,44 pg/ml). The standard deviation of the reproducibility of the variation coefficient was 18,36%. In a 20 year old gelding the lowest ACTH value was 60.9 pg/ml whereas the highest measured value was 108 pg/ml. Immediate centrifugation of blood samples resulted in significantly higher ACTH values at an average of 11.6 pg/ml. The additional use of proteinase inhibitors (aprotinine) showed no influence on ACTH levels in this study.