First detection of Hepatitis E virus in Austrian pigs by RT-qPCR

Berliner und Münchener Tierärztliche Wochenschrift 125, 281-289

DOI: 10.2376/0005-9366-125-281

© Schlütersche Verlagsgesellschaft mbH & Co. KG. 2012

Publiziert: 02/2012

Summary

Long known to cause disease outbreaks in man in countries with poor sanitary conditions, an increasing number of autochthonous HEV genotype 3 infections have been reported in industrialised countries. Genotype 3 poses an important potential zoonotic threat, with infected pigs functioning as the main reservoir. This study reports the first detected emergence of HEV in Austrian pigs. Five Austrian strains were partially sequenced and phylogenetic analysis demonstrates that they cluster within genotype 3. In addition, a reverse transcription quantitative real-time PCR (RT-qPCR) method using a MGB-hydrolysis probe was developed offering the possibility to detect the HEV genotype 3 in faeces, liquid- and tissue-samples from domestic pigs. The method was adapted to the strains found in Austria. Sensitivity of the assay was tested with different pig organs (liver, mesenteric lymph nodes and kidney) as well as with serum, bile and faeces samples. Within the dynamic range of the assay, a quantitative determination of virus loads was performed. For specificity testing several common swine pathogens were used. Results demonstrated that the proposed method allows implementation of reliable high-throughput screening of Austrian swine samples in the future.

Zusammenfassung

In Ländern mit unzureichenden sanitären Bedingungen kann das Hepatitis E-Virus (HEV) Krankheitsausbrüche bei Menschen verursachen, aber auch in industrialisierten Ländern mehren sich die Meldungen über autochthone HEV Genotyp 3- Erkrankungen. Dieser Genotyp stellt eine potenzielle zoonotische Gefahr dar, wobei die Schweinepopulation als größtes Virus-Reservoir gilt. In dieser Studie wurde HEV erstmals in österreichischen Hausschweinen nachgewiesen. Fünf Stämme wurden teilweise sequenziert und durch phylogenetische Analyse dem Genotyp 3 zugeordnet. Zusätzlich wurde eine Real-Time RT-PCR (RT-qPCR) entwickelt, mit der, adaptiert an die gefundenen österreichischen Stämme, HEV Genotyp 3 sowohl in festem und flüssigem Probenmaterial von Schweinen als auch in Schweinekot detektiert werden kann. Die Sensitivität wurde mit verschiedenen Schweineorganen (Leber, mesenteriale Lymphknoten und Niere) und auch mit Serum, Gallenflüssigkeit und Kotproben getestet. Im Rahmen des dynamischen Bereiches erfolgte die quantitative Bestimmung der Virusmenge. Um die Spezifität der Methode zu bestimmen wurden verschiedene Erreger von Schweinekrankheiten getestet. Auf Grund der Ergebnisse bietet sich diese Methode für das Screening der österreichischen Schweinepopulation auf das Vorkommen des Hepatitis E-Virus an.