DOI 10.2376/0005-9366-120-79

Berliner und Münchener Tierärztliche Wochenschrift 120, 79-85

DOI: 10.2376/0005-9366-120-79

© Schlütersche Verlagsgesellschaft mbH & Co. KG. 2007

Publiziert: 01/2007

Zusammenfassung

In dotiertem Hackfleisch wurde der qualitative Nachweis von Listeria monocytogenes mittels ELISA, Multiplex-PCR, Microarray und kulturellem Referenzverfahren durchgeführt. Hierzu wurde Schweinehackfleisch in Einheiten von 10 und 25 Gramm unter kontrollierten Bedingungen mit ca. 25 KbE Listeria monocytogenes pro Gramm beimpft. Die dotierten Proben wurden anschließend in selektiven Anreicherungsmedien inkubiert.Während der Anreicherung wurden regelmäßig Teilproben entnommen und mittels Transia plate Listeria monocytogenes-ELISA, Multiplex-PCR (Listeria duplex) mit Agargel-Elektrophorese-Detektion und Multiplex-PCR mit Microarray-Detek-tion (NUTRI®Chip) untersucht. Der Zeitpunkt, zu dem jede Probe als positiv bewertet werden konnte, wurde als Mindestanreicherungszeit definiert. Mit der kulturellen Nachweismethode wurde Listeria monocytogenes mit einem Gesamtuntersuchungsaufwand von 5 Tagen in 100 % der Proben nachgewiesen. Mit dem verwendeten ELISA-Testsystem wurde dies nach einer Mindestanreicherungszeit von 24 h erreicht. Die Detektion mittels Multiplex-PCR führte bereits nach einer Anreicherungszeit von 16 h zum sicheren Nachweis. Als sensitivste Nachweismethode erwies sich die Microarray-Detektion, bei der eine Mindestanreicherungszeit von 10 h erforderlich war, um eine Kontamination mit Listeria monocytogenes sicher nachzuweisen.

Summary

A qualitative detection of Listeria monocytogenes was performed in spiked minced pork meat using ELISA, Multiplex-PCR, Microarray and cultural reference method. Minced pork meat in batches of 10 or 25 g was spiked with 25 cfu Listeria monocytogenes per gram and incubated in selective enrichment solutions. During enrichment samples were collected continiously and a Listeria monocytogenes-ELISA, a Multiplex-PCR with electrophoretical detection (Listeria duplex) and a PCR with detection by Microarray (NUTRI™Chip) were performed.The enrichment time after which all sub-samples were positive was defined as minimum enrichment time.With the cultural reference method Listeria monocytogenes was detected in 100 % of the samples after a total analysis time of 5 days.With the ELISA kit used in this study positive results were achieved after enrichment for 24 h. Multiplex-PCR with electrophoretical detection was positive after only 16 h of enrichment.The most sensitive detection method was the microarray. Using this technique, an enrichment time of 10 h was sufficient to get positive results in all samples.