DOI 10.2377/0341-6593-114-212

Berliner und Münchener Tierärztliche Wochenschrift 114, 212-218

DOI: 10.2377/0341-6593-114-212

© M. & H. Schaper GmbH. 2007

Publiziert: 06/2007

Zusammenfassung

In der vorliegenden Arbeit wurde geprüft, ob die direkte Messung von Thiamin und seinen Derivaten im Blut möglich und geeignet ist, um den aufwendigen Transketolasetest in der Diagnostik der Vitamin B,-Versorgung von Rindern zu ersetzen. Hierzu wurden Thiamin sowie Thiamindiphosphat (TDP) und Thiamin-monophosphat (TMP) durch Auftrennung mittels HPLC-Technik über Nachsäu-lenderivatisierung im Rinderblut bestimmt und klinischen Befunden in unverdächtigen Betrieben und solchen mit CCN-Patienten gegenüber gestellt. In Vorversuchen konnte geklärt werden, dass für diese Analysen EDTA-Vollblut am besten geeignet ist. Es darf bei 6 oder auch 20 °C bis zu 10Tage gelagert werden. Sensitivität und Spezifität waren als überdurchschnittlich gut einzuschätzen und sind denen anderer Verfahren (insbesondere dem Transketolasetest) deutlich überlegen. Die Variationskoeffizienten fürdie klinisch interessanten Parameter TDP und Gesamtthiamingehalt (Summe aller Fraktionen) lagen bei 1,95 % und 2,10 %, fürThiamin und TMP bei 7,02 % und 9,17 %. Die untere Nachweisgrenze betrug 0,5 ng/ml. Das Verfahren war gut für die Anforderungen aus der Praxis geeignet (täglich bis zu 72 Proben analysierbar). Aus Blutproben von 280 gesunden Rindern (A),201 CCN-Kohortentieren (B) und 12 CCN-Patienten (C) konnten folgende Mittelwerte für die Konzentrationen (ng/ml) von Thiamin und seinen Derivaten sowie deren 95 %-Bereich berechnet werden, die sich gruppencharakteristisch deutlich voneinander unterschieden und eine Einschätzung des Erkrankungsrisikos erlaubten: (A) Thiamin 13,5 (4,61-28,8),TDP 51,0 (33,1-82,2),TMP 8,79 (2,23-18,1 ),Gesamtthiamin 73,3 (44,6-114); (B) Thiamin 8,73 (0,00-20,0),TDP 43,5 (15,5-75,7),TMP 6,15 (0,00-16,6), Gesamtthiamin 58,4 (18,7-96,5); (C) Thiamin 3,85 (0,00-11,5),TDP 14,5 (0,00-28,3),TMP 1,27 (0,00-4,87), Gesamtthiamin 19,6 (4,92-35,9). Somit steht mit der HPLC-Analyse mit Nachsäulenderivatisierung ein präzises, weitgehend automatisierbares Meßverfahren zur raschen Diagnose eines Vitamin Bl-Mangels zur Verfügung. Als kritischer unterer Normwert für gesunde Tiere lässt sich für den Gesamtthiamingehalt im Blut 40 ng/ml angeben. Das Probenmaterial (EDTA-Vollblut) kann bei bis zu 20 °C versandt werden. Im Gegensatz zu bisherigen Analyseverfahren ermöglichtes in CCN-gefährdeten Herden eine frühzeitige und rasche Abschätzung des Erkrankungsrisikos allerTiere.

Summary

The aim of this project was to develop a routine method to measure thiamine and its derivates in blood, to detect the need of vitamin B,-supply in cattle faster and more precise than until now using the transketolase test. For that, thiamine and its derivates (thiaminediphosphate =TDP,-monophosphate =TMP) were analysed in cattle blood by HPLC technigue with post-column derivatization. Moreover, the levels in healthy cattle were compared with those in herds with Single CCN cases. EDTA-blood-stored up to 10 days by 6 or 20 °C- was the most appropriate Substrate. Sensitivitiy and specifity were significantly better than those of other methods - particularly of the transketolase test.The VCs for the diagnostically important parameters were as follows:TDP and total thiamine(TT, sum of all fractions): 1.95 % and 2.10%; thiamine and TMP: 7.02 % and 9.17 %.The lowest concentration, which could be measured, was 0.5 ng/ml. 72 samples could be analysed daily. In the blood of 280 healthy calves and cows (group A), 201 clinically unsuspicious animals out of Stocks with Single cases of CCN (group B) and 12 patients with clinical obvious CCN (group C), thiamine and its phosphates were measured and the means calculated (ng/ml). After this, the thiamine Status is characterized by (ng/ml): (A) thiamine 13.5 (4.61-28.8),TDP 51.0 (33.1-82.2),TMP 8.79 (2.23-18.1),TT 73.3 (44.6-114); (B) thiamine 8.73 (0.00-20.0), TDP 43.5 (15.5-75.7),TMP 6.15 (0.00-16.6),TT 59.4 (18.7-96.5); (C) thiamine 3.85 (0.00-11.5),TDP 14.5 (0.00-28.3),TMP 1.27 (0.00-4.87),TTP 19.6 (4.92-35.9). So, HPLC with post-column derivatization offers a precise,automatically working method for a fast diagnose of thiamine deficiency.The lowest critical value of TT is 40 ng/ml for healthy animals in the blood.The sample (EDTA-blood) can be posted simply at temperatures up to 20 °C. In comparison to other measuring methods, this HPLC-technigue enables an early recognition of the risk to come down with CCN in endangered cattle herds.